「硫酸铵沉淀」硫酸铵沉淀法纯化蛋白质
今天我们来聊聊硫酸铵沉淀,以下6个关于硫酸铵沉淀的观点希望能帮助到您找到想要的百科知识。
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请问硫酸铵沉淀的方法是什么?
硫酸铵可能会损坏某些蛋白.加入硫酸铵晶体时应小心：局部浓度过高可能会造成不需要的蛋白沉淀.
对于常规可再生的纯化过程,可以避免使用硫酸铵沉淀以利于层析.
通常沉淀对于浓度低于1mg/ml的蛋白几乎无效.
沉淀所需溶液：
饱和硫酸铵溶液（在100ml蒸馏水中加入100g硫酸铵,搅拌溶解）.
1M Tris-HCl,pH 8.0
用于第一步纯化的缓冲液.
方法：
1,过滤（0.45μm膜）或离心样品（4°C 10000g）.
2,每10倍体积的样品中加入一倍的1M Tris-HCl,pH 8.0以维持pH值.
3,温和搅拌.逐滴加入硫酸铵溶液,最高至50%饱和度.搅拌1小时.
4,10000g离心20min.
5,去除上清,用等体积相同浓度的硫酸铵溶液（如不能溶解沉淀也不会造成进一步沉淀的溶液）洗涤重悬沉淀两次.再次离心.
6,使用少量体积后面步骤所需的溶液溶解沉淀.
7,硫酸铵在净化/更换缓冲液步骤中使用脱盐柱除去.
请问硫酸铵沉淀的方法是什么？
硫酸铵可能会损坏某些蛋白。加入硫酸铵晶体时应小心：局部浓度过高可能会造成不需要的蛋白沉淀。
对于常规可再生的纯化过程，可以避免使用硫酸铵沉淀以利于层析。
通常沉淀对于浓度低于1mg/ml的蛋白几乎无效。
沉淀所需溶液：
饱和硫酸铵溶液（在100ml蒸馏水中加入100g硫酸铵，搅拌溶解）。
1M Tris-HCl，pH 8.0
用于第一步纯化的缓冲液。
方法：
1，过滤（0.45μm膜）或离心样品（4°C 10000g）。
2，每10倍体积的样品中加入一倍的1M Tris-HCl，pH 8.0以维持pH值。
3，温和搅拌。逐滴加入硫酸铵溶液，最高至50%饱和度。搅拌1小时。
4，10000g离心20min。
5，去除上清，用等体积相同浓度的硫酸铵溶液（如不能溶解沉淀也不会造成进一步沉淀的溶液）洗涤重悬沉淀两次。再次离心。
6，使用少量体积后面步骤所需的溶液溶解沉淀。
7，硫酸铵在净化/更换缓冲液步骤中使用脱盐柱除去。
为什么硫酸铵能沉淀蛋白质?
溶液中的离子强度不同时，不同蛋白质的溶解度不同。
高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。
各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。
扩展资料：
硫酸铵沉淀法是粗分离蛋白时常用的纯化和浓缩蛋白的技术蛋白质的溶解度和盐浓度密切相关，在低浓度的条件下，随着盐浓度的增加，蛋白质的溶解度增加；但在高浓度的盐溶液里，盐离子竞争性的结合蛋白表面的水分子，破坏蛋白表面的水化膜，溶解度降低，蛋白质在疏水作用下聚集形成沉淀。
每种蛋白质的溶解度不同，因此可以用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质硫酸铵的溶
解度大，解离形成大量的NH4、SO离子，会结合大量的水分子，使蛋白质的溶解度下降，另外，其温度系数小，不易使蛋白质变性。
因此，蛋白质粗分离时硫酸铵沉淀法是很重要的一种技术，后续可采用层析技术进一步纯化蛋白，效率更高。硫酸铵沉淀法是常用的分离免疫球蛋白的方法。
为什么硫酸铵沉淀法纯化蛋白质中利用固体硫酸铵而不用硫酸铵溶液？
用硫酸铵沉淀法纯化蛋白质，利用固体硫酸铵，而不用硫酸铵溶液，是因为固体硫酸铵效率比硫酸铵溶液效率高得多。
总硫酸铵沉淀法纯化蛋白质采用的是盐析法。当硫酸铵溶液达到饱和时，蛋白质大量析出。采用硫酸铵，因为不含有水，可以很快达到饱和度，从而使蛋白质析出。而采用硫酸铵溶液，会带入大量的水，即使能够使蛋白质析出，因为硫酸铵溶液带入的大量的水，也会导致溶液大量稀释，使析出效率大大降低。因此，必需使用无水的固体氯化铵作为析出剂。
硫酸铵分级沉淀法原理和步骤是什么啊？
原理就是溶液中的离子强度不同时，不同蛋白质的溶解度不同，步骤就是不断加硫酸铵…以血浆为例：加到盐浓度20~30%时纤维蛋白原沉淀，再加到浓度50%时球蛋白沉淀，饱和时清蛋白沉淀…
硫酸铵沉淀浓缩蛋白质时浓度怎么计算的呢
1、硫酸铵浓度的计算就根据硫酸铵饱和度表来计算，比如60%的硫酸铵就是指体系中硫酸铵的浓度达到同温度下硫酸铵饱和浓度的60%，这个和硫酸铵的摩尔浓度没有关系。
2、直接根据饱和度表在蛋白溶液中加入适当重量的固体硫酸铵即可。
3、硫酸铵的饱和度随着温度有少许变化：
0度时，每升水可以溶解706.96克硫酸铵（此时重量百分比为41.42%,摩尔浓度为5.35 mol/L，比重1.2428g/cm3）。
25度时，每升水可以溶解769.05克硫酸铵（此时重量百分比为43.46%,摩尔浓度为5.82 mol/L，比重1.2449g/cm3）
至于从某一硫酸铵浓度调节到另一浓度，许多生化手册可以查到表，免去自己计算可能的不准确。
例如：《生物化学制备技术》苏拔贤主编（科学出版社），第58页、59页两个表分别为在25度和0度进行硫酸铵沉淀的表。
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